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繼續分享金相顯微鏡的顯微攝影（下）
5．攝影膠卷
（1）攝影膠卷的種類
攝影用的感光膠卷種類很多，以全色黑白軟片使用zui普遍，如120、135膠卷都是經常使用的全色黑白片。這種膠卷對波長為3300—7000埃范圍內的光均能感光，所以稱為全色片，但在5000一5500埃波段（綠光）感光度稍有降低。由于它的感光度強，分辨本高，容易生產和保存，所以使用很普遍。另—種是分色片，對于波長為3300一5800埃波長范圍內的光均能感光。此外，經常使用的還有普通彩色片，影調呈彩色，它是用感色性不同納三種乳劑涂布在基片上而成，經過曝光，顯影相成色的加工過程，得到黃、品紅、青三種補色，分別記錄U標的Z種原色光分解的物象。由于人限辨別彩色影調的能力比辨別黑白影調的能力高100倍，因此，使用彩色膠卷攝影金相照片對金相分析更為有利。
（2）攝影膠卷感光速度
攝影感光膠卷zui重要構特性之一是感光速度。膠卷的光速度簡單地說是指膠卷在曝光、沖洗后感光膠卷變黑至適當程度所需要的曝光量。一般來說，感光速度快的底片，感光乳劑中銀鹽顆粒粗，所需曝光量少，分辨率較低，而已灰霧現象比較嚴重，物象色調不夠明朗，層次減少。感光速發慢的底片，銀鹽順粒細小，所需曝光量大，它的分辨本高，物象清晰明朗，層次細節明顯，克服了感光速度快的膠片的缺點。
金相顯微鏡攝影對底片的感光速度要求不高，而對分辨率的要求比較高，因而選用感光速度惺的膠卷為宜。至于曝光時間長的缺點，可由增加光源亮度的方法彌補。
關于照相膠卷的感光速度，各國都有各自的測定標演。一般，數字大的感光速度快，數字小的感光速度慢。國外照相膠卷的外包裝盒上常有
等字樣，這些數字是各國不同的測定感光度的標志。目前國產的照相底片，是以“GD2l”、“GB24”叫等標志的。為了便于計算，現列出各種常用膠卷感光速度換算表（見表4—1），以供參考。 
（3）使用攝影膠卷的注意事項
使用膠卷時，耍注意下列幾點：
1）膠卷的有效年陸每個膠卷念上都印有使用到期年限，如某年某月等。膠卷一過期，感色能力就逐漸減遲，灰霧度增大，物象層次減少，反差降低，甚至使腦膜脫落等。所以，過期膠卷盡量不要使用。當然不是說過期僅幾天就不能用了，如果保管特別好，過期幾個月還沒有發生顯著變化的膠卷還是可以用的。
2）防潮防熱：膠片zui怕潮濕和高溫，因為潮熱會使膠片的感光能力減免灰霧度增大。所以存放在干燥、涼爽、黑暗和空氣流通的地方。如果存在柜內，應用玻璃缸承放，缸內放入硅膠或氯化鈣等吸潮劑。若吸潮劑已變色或已受潮，要及時更換，以保持缸內干燥。
3）防止漏光：先應檢查片盒是否有損壞，以免漏光。在暗寶內將膠片裝好后用黑布包裹片盒并在有黑布遮蓋的情況下裝在照相裝置上，攝影時也應用黑布蓋著。裝在片盒里的膠卷，短時間內攝影完。特別在夏色天氣濕熱，膠片藥膠與空氣接觸久了，容易發灰。
6．底片曝光
顯微攝影中將物象投射到照相底片上的過程，稱為曝光。照相快門持續張開的時間，稱為曝光時間。
曝光是顯微攝影中的重要環節，曝光是否準確，決定著照片的質量。即使一切條件都已選擇良好，只要曝光發生錯誤，就會使照片質量顯著下降，甚至成為廢品。
（1）影響曝光的因素
影響曝光的因素很多，照明光源的亮度引起曝光時間的差別就很大。例如用高亮度的氙燈和弧光燈照明，曝光時間在幾分之一秒到幾秒之間；用普通鎢絲白熾燈照明，曝光時間長達幾分鐘到十幾分鐘。物體的特性對曝光的影響也很大，例如粗大的，區別明顯的單元所組成的組織，或光亮和鮮明的組織，所需的曝光時間比細小的，暗淡的或對比度差的組織要短一些。此外，照明方式，照明光源電壓的穩定性，底片的性能，濾色片的顏色，物鏡的數值孔徑和放大倍數，攝影目鏡的倍數，攝影腔的伸長度等都對曝光產生影響。因此希望利用計算的辦法來求得正確的曝光時間是困難的。但是合些條件的變動對曝光的影響有一定規律，這些個別的變動可加以計算校正。現分述如下。
1）物鏡孔徑與曝光時間的關系
曝光時間與物鏡有效數值孔徑的平方成反比，參看表4—2。表中的曝光因數是設數值孔徑為0.5時，曝光因數為1而得出的。
所謂方效孔徑是指實際能利用到的物鏡孔徑。例如一個數值孔徑為0.85的物鏡，因為孔徑光欄縮小，使它的孔徑變小，有效數值孔徑就個是0.85了。曝光時間與數值孔徑平方成反比的規律，只對同一工廠同一時期生產的物鏡才比較避確。不同工廠的產品及同一工廠不同時期的產品，因物鏡的結構及透鏡鍍膜的不同，很難進行比較。
2）物鏡倍數與曝光時間的關系
曝光時間與物鏡放大倍數的平方成正比，參看表4—3。表中的曝光因數是設10 x物鏡的曝光因數為1而得出的。
這個規律對任何物鏡都是正確的。但通常物鏡倍數增高問，數值孔徑也隨著增加，因此，曝光時間的增減有抵消的趨勢。但由廠放大倍數與數值孔徑并不是成比例的增加，有時會相差很大，所以還將要計算。
3）目鏡倍數及目鏡至底片距離與曝光關系
曝光時間與目鏡放大倍數的平方成正比。但不同類型的目鏡彼此之間有差別。
目鏡至底片的距離就是攝影腔的伸長度。曝光時間與此距離的平方成正比，參看表4—4。表中數據是以目鏡到底片距離為25厘米的曝光因數為l而求得的。
（2）曝光時間的確定
由于影響曝光的因素很多，只按某些因素估計出一個準確的曝光時間是不可靠的。即使從投射到毛玻璃上物象的亮度來確定曝光時間，也是容易發生錯誤的。因此，經常從目顯微攝影的工作人員，應當設立一個記錄本，詳細記錄每口拍攝的目標特點，儀器組合，照明條件，性能參數，曝光即問和底片沖洗后的質員，為以后的攝影工作提供依據。要正確測定曝光時間，可以采用下述方法。
試攝法：就是在儀器組合，照明條件攝影目標均相同曝光時間不同的情況下，伯出五條不同的影象，用反復試理法，求出準確限光時間。例如以一分鐘左右的曝光時間為宜。則把暗盒的擋光板拉出五分之一曝光兩分鐘，再把擋光板拉出五分之一曝光—分鐘，以后每拉出五分之一曝光一次。招拉三次，而各次順序眼光30秒、15秒、15秒。這樣在—張底片上便能得到4分、2分、 1分、30秒和15秒五級不同的曝光時間。顯影后，如看出一分鐘至30秒之間zui為適宜，那就將此再分五級，作同樣的曝光試驗，直至求得zui合適的曝光時間為止。
進行上述試攝陸試攝曝光時間應按幾何級數增訊即1、2、。4、8、16、32……等。這樣才斃迅速準確地測定曝光時間。在無把握的情況下，可采用1、3、9、27、81…”等倍數曝光。不要用算術級數1、2、3、4……等的曝光倍數，否則只會浪費時間和底片。
用試攝法求出準確曝光時間后，就可進行金相攝影工作。若在拍攝中某些條件發生變化，例如更換物鏡、攝影目鏡或攝影脾長度改變時，可用上節計算方法增減曝光時間。
曝光表測定對有曝光表附件的金相顯微鏡，可把攝影裝置上的對光玻璃取下，把曝光表的感受部分安裝在放置底片的位置上，把顯微鏡調節在攝影狀態，讀出曝光表指針位置的數值，然后根據附表換算出準確的曝光時間。這雖是一種簡便的方法，但必須在暗室中進行。
若毛玻璃處物象亮度太弱，可將測光表對準物象的明亮部分測定。如果亮度仍太弱，測光表指針不偏轉或偏轉很少時，可將試樣移開，換上普通的玻璃鏡子，再測定鏡子反光形成的亮視場。由此測得的曝光時間，再適當增加l一2倍就可作為需要的曝光時間。如果這樣的亮度仍太弱，測光表指針還是不動，可將表的受光部位逐漸向攝影目鏡方向移動，直到測光表指針能目準確定出曝光時間為止。設此時對于f/1.0曝光時間為t，量出測光表受光部位到攝影目鏡距離為d，再量出攝影目鏡到底片的距離為D，則正確的曝光時間T為
但應注意不要使測光表過分接近目鏡。只要目鏡射出的成象光束亮團等于測光表的方形（或圓形）受光面積即可停止。因這時全部成象光束已射入陽光表中，如此時指針仍不能偏輪表示成象光束太弱，必須采用更靈敏的測光表進行測量。
（3）防振和清潔
zui后，在金相顯微鏡攝影中還要注意振動的影響及光學系統的清潔問題。有些微小的振動，雖不明顯，但在攝影中卻很敏感。任何不穩定或振動發生在曝光時間內，都可使照片質量顯著降低。在高、中級型金相顯微鏡的底座中，都裝有防震裝置，以便在輕微振動的環境中仍能從事金相攝影。但操作者應經常檢查這些裝置的可靠性，并應調整到正確的使用位置上。
光學系統表面落有灰塵、油脂、指印或擦傷痕跡，都會降低照片的質量。為此可用吹風球，柔軟的小毛掃，搓洗干凈的脫脂織麻布把灰塵除去，或用甲苯清洗。
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